Indirect ELISA (iELISA) standardization for the diagnosis of bovine enzootic leukosis / Padronização de um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da leucose enzoótica bovina

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.(AU)

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo "bovine leukemia virus" (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis "lung" (Tb1Lu) livre de "bovine viral diarrhea virus" (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens "fetal lamb kidney" (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial "Chekit Leucose-Serum". Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA "Chekit Leucose-Serum", o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.(AU)

Clinical and pathological aspects of bovine lymphoma affecting the spinal cord / Aspectos clínicos e patológicos de linfoma bovino afetando a medula espinhal

Clinical and pathological features of bovine lymphoma involving the spinal cord were evaluated through a retrospective study of the necropsy database from 2005 to 2017. Thirty-four cases of bovine lymphoma were found, 24 of which had central nervous system involvement restricted to the spinal cord. All cattle were Holstein cows 2.5-12 years-old (median age, six years-old). The clinical course was 7-21 days, and the main neurological sign was pelvic limb paresis (81.8%). The lymphoma often affected the spinal cord in a multifocal manner. Lumbar segments were the mostly affected sites (23/24), followed by the sacral segments and cauda equina (20/24), cervical (5/24) and thoracic (5/24) segments. Tumors were in the epidural space, peripheral to the pachymeninges (extradural) and between layers of adipose tissue. In addition, two cases had progressive hemorrhagic myelomalacia. Further organs affected included the lymph nodes (100%), abomasum (79.2%), heart (75%) and kidneys (45.8%). Microscopically, all lymphomas had a diffuse pattern, with no meningeal or medullar infiltration. According to the REAL/WHO classification, all these neoplasms were mature B-cell lymphomas. Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) was observed in 95.8% (23/24) of the cases. The following subtypes were observed in the DLBCL group in descending order: immunoblastic (60.9%, 14/23), centroblastic (26.1%, 6/23), anaplastic (8.7%, 2/23) and T-cell rich (4.3%, 1/23).(AU)

Os aspectos clínicos e patológicos do linfoma bovino afetando a medula espinhal foram avaliados através de um estudo retrospectivo dos protocolos de necropsia durante o período de 2005-2017. De um total de 34 bovinos com linfoma, 24 apresentaram afecção do sistema nervoso central (SNC) restrito a medula espinhal. Todos os bovinos afetados eram fêmeas, da raça Holandesa, com 2,5 a 12 anos de idade (idade mediana de seis anos). Clinicamente, os casos tiveram uma evolução de sete a 21 dias, com a principal alteração neurológica caracterizada por paresia de membros pélvicos, a qual foi observada em 81,8% dos casos. O linfoma afetou frequentemente a medula espinhal de maneira multifocal. Os segmentos lombares foram os mais envolvidos (23/24), seguidos pelos sacrais e cauda equina (20/24), cervicais (5/24) e torácicos (5/24). Os tumores estavam localizados no espaço epidural, periférica à paquimeninge (extradural) e associada ao tecido adiposo. Em dois casos foi também observada mielomalacia hemorrágica progressiva. Os órgãos acometidos com maior frequência, concomitantemente ao espaço epidural, foram os linfonodos (100%), abomaso (79,2%), coração (75%) e rins (45,8%). Microscopicamente, todos os linfomas exibiam um padrão difuso, sem infiltração em meninges e medula espinhal (extradural). De acordo com a classificação da REAL/WHO, todos esses neoplasmas foram incluídos como linfomas de células B maduras. O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) foi observado em 95,8% (23/24) dos casos. Os subtipos classificados dentro do grupo dos LDGCB's foram em ordem decrescente: imunoblástico (60,9%; 14/23), centroblástico (26,1%; 6/23), anaplásico (8,7%; 2/23), e rico em células T (4,3%; 1/23).(AU)

Performance assessment of imported ELISA in the serodiagnosis of the enzootic bovine leukosis in herds of Pernambuco state, Brazil / Avaliação do desempenho de ELISA importado no sorodiagnóstico da leucose enzoótica bovina em rebanhos do estado de Pernambuco, Brasil

Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease of cosmopolitan distribution and chronic character caused by a virus of the Retroviridae family, bovine leukemia virus (BLV). The epidemiological situation of EBL in Brazil has motivated studies to improve its diagnosis, based on the recommended serological techniques: agar gel immunodiffusion (AGID) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). This study was designed to evaluate the use of imported ELISA for the detection of BLV in dairy herds raised in Pernambuco, Brazil, comparing it to AGID. Blood serum samples from 327 dairy cattle from the state of Pernambuco were tested to AGID and the imported commercial ELISA CHEKIT-Leucose-serum, produced by the IDEXX® laboratory for the diagnosis of EBL. Discarding 25 inconclusive samples from one or both tests, 302 samples were analyzed, being 24.1% positive (73/302) in the AGID and 45% (136/302) in the ELISA, which compared to the AGID, a technique considered standard, presented sensitivity of 98.6%, specificity of 72% and Kappa coefficient of 0.55. The lack of agreement in the diagnostic methods was probably due to the high sensitivity of the ELISA, which makes it possible to detect antibodies even in situations with low serum levels. Although AGID has been shown to be an efficient test so far, in more advanced stages of an EBL control and eradication program, with low prevalence rates, ELISA will present better performance, due to its higher sensitivity, avoiding the permanence of animals that spread the disease in the herds.(AU)

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa de distribuição cosmopolita e caráter crônico causada por um vírus da família Retroviridae, o vírus da leucemia bovina (VLB). A situação epidemiológica da LEB no Brasil vem motivando estudos para o aprimoramento do seu diagnóstico, tendo como base as técnicas sorológicas recomendadas: imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay (ELISA). Este estudo teve como objetivo avaliar o uso de ELISA importado para a detecção do VLB em rebanhos leiteiros criados em Pernambuco, Brasil, comparando-o ao IDGA. Amostras de soro sanguíneo de 327 bovinos leiteiros do estado de Pernambuco foram testadas para IDGA e ELISA comercial importado CHEKIT-Leucose-serum, produzido pelo laboratório IDEXX® para o diagnóstico da LEB. Descartadas 25 amostras inconclusivas de um ou ambos os testes, foram analisadas 302 amostras, sendo 24,1% positivas (73/302) na IDGA e 45% (136/302) no ELISA, que em relação à IDGA, técnica considerada padrão, apresentou sensibilidade de 98,6%, especificidade de 72% e coeficiente Kappa de 0.55. A falta de concordância entre os métodos diagnósticos deveu-se, provavelmente, à elevada sensibilidade do ELISA, que possibilita detectar anticorpos mesmo em situações com baixos teores séricos. Apesar da IDGA se mostrar até o momento um teste eficiente, em etapas mais avançadas de um programa de controle e erradicação da LEB, com baixos índices de prevalência, o ELISA apresentará melhor desempenho, por possuir maior sensibilidade, evitando-se a permanência de animais disseminadores da doença nos rebanhos.​(AU)

Development of an indirect ELISA based on recombinant capsid protein to detect antibodies to bovine leukemia virus

Abstract Serological testing and culling infected animals are key management practices aiming eradication of bovine leukemia virus infection. Here, we report the development of an indirect ELISA based on BLV recombinant capsid protein (BLVp24r) to detect anti-BLV antibodies in cattle serum. The BLVp24r was expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography, and then used to set up the ELISA parameters. The Polysorp ® plate coated with 50 ng of antigen/well and bovine serum diluted 1:100 gave the best results during standardization. Using sera from infected and non-infected cattle we set up the cutoff point at 0.320 (OD450 nm) with a sensitivity of 98.5% and specificity of 100.0%. Then, we tested 1.187 serum samples from dairy (736 samples) and beef cattle (451 samples) with unknown status to BLV. We found that 31.1% (229/736) and 9.5% (43/451) of samples amongst dairy and beef cattle, respectively, had IgGs to BLV. The rate of agreement with a commercial competitive ELISA was 84.3% with a κ value of 0.68. Thus, our BLVp24r iELISA is suitable to detect BLV infected animals and should be a useful tool to control BLV infection in cattle.

Classificação de 86 casos de linfoma em bovinos de acordo com a Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin's Lymphomas for Clinical Usage e a Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL) / Classification of 86 bovine lymphomas cases according to the Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin's Lymphomas for Clinical Usage and The Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL)

Por meio de um estudo retrospectivo, realizou-se avaliação fenotípica (histologia) e imunofenotípica (imuno-histoquímica [IHQ]) de 86 casos de linfoma bovino. Quanto ao padrão de distribuição, todos os linfomas foram incluídos como difusos. Em relação à dimensão dos linfócitos neoplásicos, 83,8% dos linfomas foram considerados como de grandes células e 11,6% como de pequenas células. Linfomas mistos, ou seja, constituídos por grandes e pequenas células, representaram apenas 4,6% dos casos. Quanto ao número de mitoses, 84,9% dos linfomas foram incluídos como de grau intermediário, 10,5% como de baixo grau e 4,6% como de alto grau. No que se refere à morfologia do núcleo, linfomas em que predominavam linfócitos não clivados (58,2%) ou linfócitos clivados (37,2%) foram mais frequentes do que aqueles em que havia uma mistura igualmente proporcional de linfócitos clivados e não clivados (4,6%). Com base nestes resultados, os 86 linfomas foram assim distribuídos utilizando-se a classificação proposta pela Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin's Lymphomas for Clinical Usage: difuso de grandes células não clivadas (46,5%), difuso de grandes células clivadas (33,7%), difuso de pequenas e grandes células (4,6%), difuso de pequenas células - tipo plasmocitoide (7%), imunoblástico (3,5%), difuso de pequenas células - tipo intermediário (2,3%), difuso de pequenas células não clivadas (1,2%) e difuso de pequenas células não clivadas - tipo Burkitt (1,2%). Na imuno-histoquímica, 27 dos 86 (31,4%) linfomas foram positivos para o anticorpo monoclonal CD79αcy, utilizado para detecção de linfócitos B, e nenhum caso foi positivo para o anticorpo policlonal CD3, utilizado para detecção de linfócitos T. Com base nestes resultados, os 27 linfomas B foram assim distribuídos utilizando-se a Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL): linfoma difuso de grandes células B (81,5%), linfomas imunoblásticos de grandes células (11,1%) e linfomas...

A retrospective study of 86 cases of bovine lymphoma classified as with diffuse pattern of distribution and verified by phenotypic (histology) and immunophenotypic (immunohistochemistry [IHC]) is presented. Regarding the size of the neoplastic lymphocytes, 83.8% was classified as large cells lymphoma and 11.6% as small cells lymphoma. Mixed lymphomas, i.e., formed by large and small cells simultaneously represented only 4.6% of all cases. Regarding their mitotic index, 84.9% of lymphomas was included in the intermediate-grade, 10.5% as low-grade and 4.6% as high-grade. Regarding the nucleus morphology, lymphomas with mostly non-cleaved cells (58.2%) or cleaved cells (37.2%) were the more frequent than those with a balanced mixed proportion of cleaved and non-cleaved cells (4.6%). Based on these results, the 86 lymphoma cases were classified by the Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin's Lymphomas for Clinical Usage as: diffuse large non-cleaved cell (46.5%), diffuse large cleaved cell (33.7%), diffuse mixed small and large cell (4.6%), diffuse small cell - plasmacytoid (7%), immunoblastic (3.5%), diffuse small cell - intermediate (2.3%), diffuse small non-cleaved cell (1.2%), and diffuse small non-cleaved cell Burkitt's (1.2%). According to the IHC, 27 out of 86 (31.4%) lymphomas were positive to monoclonal antibody CD79αcy, used to detect B cells, and none were positive for polyclonal antibody CD3, used to detect T cells. Based on this, the 27 B-cell type lymphomas were distributed as follows: diffuse large B-cell lymphoma (81.5%), large cell immunoblastic lymphoma (11.1%), and lymphoplasmacytoid lymphoma...

Intercorrência entre leucose enzoótica e brucelose em búfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produção extensivo / Intercurrence of enzootic leucosis and brucellosis in buffaloes (Bubalus bubalis) in extensive production system

Objetivou-se com este estudo avaliar a intercorrência entre leucose enzoótica e brucelose em búfalos (Bubalus bubalis) em sistema de produção extensivo, pelo estabelecimento da prevalência de bubalinos reagentes às provas diagnósticas específicas. Foram analisados sorologicamente 232 animais, pela técnica de imunodifusão dupla em gel de agarose para diagnóstico de leucose enzoótica e o teste do antígeno acidificado tamponado, seguida pelos testes confirmatórios 2-mercaptoetanol e soroaglutinação lenta em tubos para diagnóstico de brucelose. As prevalências de búfalos que apresentaram positividade para leucose e brucelose foram 4,21% (10/232) e 5,18% (12/232), respectivamente. Os resultados obtidos nesta pesquisa permitiram concluir que as infecções estudadas encontram-se presentes na população avaliada, entretanto, com baixa prevalência e sem dependência de ocorrência entre ambas.

This study was carried out to evaluate the intercurrence of brucellosis and enzootic leucosis in buffaloes in extensive production system by establishing the prevalence of reagent buffaloes for specific diagnostic tests. We analyzed 232 animals serologically by the technique of double immunodiffusion in agarose gel (AGID) for diagnostic of leucosis and the tampon acidified antigen (TAA) test, followed by confirmatory tests of 2-mercaptoethanol (2-ME) and slow serum agglutination (SSA) in tubes for diagnostic of brucellosis. The prevalence of buffaloes that were positive for leucosis and brucellosis tests were 4.21% (10/232) and 5.18%(12/232) respectively. The results of this investigation indicated that the diseases occur in the population studied, however, with low prevalence and without depending on the occurrence of both.

Linfoma multicéntrico o linfosarcoma multicéntrico en búfalo de agua (Bubalus buballs): estudio anatomopatológico: reporte de un caso / Multicentric lymphoma or multicentric lymphosarcoma in water buffaloe (Bubalus bubalIs): pathologic anatomy: report of one case

La leucosis enzoótica bovina (LEB), también conocida como leucosis viral bovina (LVB), es una enfermedad neoplásica de origen viral, producida por un oncornavirus tipo C (retroviridae) que ocurre con o sin formación de nódulos neoplásicos. La leucosis bovina (LB) en Venezuela ha sido diagnosticada clínicamente en base a las manifestaciones y evidencias clínico patológicas, así como sobre los cambios anatomopatológicos que han sido descritos en algunos casos, pero ninguno publicado. Se han hecho reportes de esta enfermedad en bovinos de leche, evidenciando la presencia de casos sin formación de nódulos neoplásicos, los cuales han sido considerados sospechosos, en razón de no haber realizado pruebas serológicas en el laboratorio. De igual forma, se han descrito casos de leucosis con formación de nódulos neoplásicos en diferentes órganos y han sido reportados como casos sospechosos de LB. La literatura refiere la existencia de cuatro (4) formas de leucosis: multicéntrica adulta, juvenil poco común, tímica y cutánea. Esta clasificación, es referida a los casos con presencia de nódulos neoplásicos constituidos por tejido linfoide anaplástico, sobre el cual se fundamenta el diagnóstico anatomopatológico. En el presente trabajo se reporta un caso de linfoma o linfosarcoma multicéntrico que se describe como sospechoso de LB en una búfala de agua de 10 años de edad en el estado Mérida, Venezuela, fundamentado en el diagnóstico anatomopatológico, con descripción de los cambios macro y microscópicos observados. Adicionalmente se reporta una ocurrencia de 2 por ciento de positividad a LB mediante las técnicas ELISA y AGID en el rebaño (300 búfalos) de la misma procedencia del caso descrito.

Bovine Enzootic Leukosis (BEL), also known as Viral Bovine Leukosis (VBL), is a viral, oncornavirus type C (retroviridae), neoplasic disease which occurs with or without neoplasic nodules. The disease has been clinically and morphologically diagnosed as suspicious cases in Venezuela since lab serological tests were not performed. Macroscopic and microscopic changes have been described in a few cases with neoplastic nodules and referred as a Bovine leukosis (BL), but none has been published. Bovine leucosis has also been referred in milking cows with or without neoplasic nodules, most cases have not been diagnosed by blood serum analysis and considered to be only suspicious cases. There are four distinct forms of BL (adult mullticentric, juvenile uncommon, thymic and cutaneous) have been reported in the literature around the world, this classification is based upon the presence of neoplasic nodules composed of anaplastic lymphoid tissue. This work reports a case of multicentric form of bovine lymphoma which could be suspicious of BL, in a 10 years old female water buffaloe in Mérida State, Venezuela. This report of one case of lymphosarcoma is supported by macroscopic and microscopic changes described. Aditionally, a frequency of 2 percent of positive cases diagnosed by ELISA and AGID tests is reported in the herd (300 buffaloes) of similar procedence of the described case.

Leucemia linfocítica crônica em cão: relato de caso / Chronic lymphocitic leukemia in dog: case report

O presente relato refere-se a um caso de leucemia linfocítica crônica (LLC) diagnosticada no Hospital Veterinário da FMVZ - UNESP, Campus de Botucatu, em um cão da raça Doberman, fêmea, com nove anos e oito meses de idade que apresentava anorexia e histórico de dificuldade locomotora. Ao exame físico observou-se hepato e esplenomegalia. O diagnóstico foi baseado nos resultados do hemograma (hemácias: 2,4 x 106/mL; hemoglobina: 5,6g/dL; hematócrito: 16 por cento), linfocitose (40,1 x 103/mL) e trombocitopenia (32,5 x 103/mL) e no exame citológico da medula óssea onde se observou celularidade aumentada com hipoplasia severa das séries megacariocítica, mielóide e eritróide. A série linfóide apresentou-se marcadamente aumentada, sendo representada principalmente por linfócitos pequenos e médios e em menor grau por plasmócitos.

Chronic lymphocytic leukemia (CLL) was diagnosed in a 9-year-old-female Doberman Pinscher presented to the hospital of FMVZ - UNESP, Botucatu with anorexia and locomotion abnormalities. Clinical examination revealed hepato and splenomegaly. The diagnose was based on CBC results which showed anemia (RBC 2.4 x 106/mL; hemoglobin 5.6g/dL; PCV 16 percent), lymphocytosis (40.1 x 103/mL) and thrombocytopenia (32.5 x 103/mL) and in bone marrow evaluation which showed increased cellularity with severe myeloid, erythroid and megakaryocytic hypoplasia. The lymphoid series was marked increased, represented mainly by small and medium lymphocytes and occasional plasma cells.

Influência da leucose enzoótica bovina na função fagocítica de leucócitos circulantes em animais manifestando linfocitose persistente / Influence of enzootic bovine leukosis on phagocytic function of circulating leukocytes from animals with persistent lymphocytosis

Avaliou-se, por citometria de fluxo, a fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (IP), por leucócitos circulantes obtidos de cinco fêmeas bovinas negativas no sorodiagnóstico para a Leucose Enzoótica Bovina (LEB); de cinco fêmeas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP); e de cinco fêmeas infectadas, porém alinfocitóticas. Observou-se que, entre as amostras dos animais soronegativos, a porcentagem média de células realizando fagocitose (12,90%) não diferiu da observada entre as células dos animais alinfocitóticos (14,70%). Contudo, ambas foram maiores (p=0,047) que aquela verificada entre as células obtidas de animais manifestando LP (7,20%). Além disso, a intensidade média de fagocitose (caracterizada pela intensidade de fluorescência do IP, em valores arbitrários), verificada em leucócitos de animais manifestando LP (17,43) foi menor (p<0,001) que a observada em leucócitos de animais alinfocitóticos (29,50), e que a observada em leucócitos de animais soronegativos (25,18), que não diferiram entre si. Assim, os resultados permitem-nos alvitrar que há alteração na função fagocítica de leucócitos circulantes em animais infectados pelo vírus da LEB, manifestando LP.

This study evaluated the phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa) by circulating leukocytes obtained from five Enzootic Bovine Leukosis (EBL)-negative cows, five naturally EBL-infected, non-lymphocytotic cows, and five EBL-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), analyzed by flow cytometry. Among cells obtained from EBL-infected cows, presenting PL, the percentage of leukocytes carrying out phagocytosis (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected (12.90%), and from BLV-infected, non-lymphocytotic cows (14.70%). Furthermore, leukocytes obtained from EBL-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence) than leukocytes obtained from non-infected and from EBL-infected, non-lymphocytotic, cows (p<0.001). Therefore, results show a decreased phagocytic function among circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows.

Simultaneous presence of bovine papillomavirus and bovine leukemia virus in different bovine tissues: in situ hybridization and cytogenetic analysis

Bovine papillomavirus (BPV) DNA sequences were detected in different tissues, in addition to epithelium. Cytogenetic abnormalities were observed in blood lymphocytes. The presence of more than one virus in a single tissue is a difficult aspect to evaluate, especially when the DNA sequences are detected in tissues that are not specifically targeted by the virus. BPV and bovine leukemia virus (BLV) are clastogenic, causing chromosome aberrations in peripheral blood lymphocytes. In the present study, we investigated the simultaneous presence of DNA sequences of both viruses and the possibility of vertical transmission and compared the types of chromosome aberrations related to viral action. BPV 1, 2, and 4 DNA sequences were found in three females of the herd and in their offspring. BLV DNA sequences were not detected in their progeny. A newborn calf that was negative for BLV infection showed specific chromosome rearrangements possibly related to the effect of infection with BPV.

Enzootic bovine leukosis: performance of an indirect ELISA applied in serological diagnosis

Bovine Leukosis Virus (EBLV) is a widely distributed pathogen agent in the bovine population of many countries, especially in dairy cattle. Once the bovine is infected, it remains as a virus carrier for life and such state is correlated with a specific antibody detectable level. In this study the evaluation of an indirect ELISA (Leucokit-La Plata) to detect antibodies against EBLV is presented. Comparing it with the Immunodiffusion as gold standard test, the sensitivity is 98.93 percent, the specificity 79.74 percent, the negative predictive value 99.56 percent and the positive predictive value 61.26 percent. The correspondence between both tests is 83.9 percent which is similar to the result mentioned by other authors (82.2 percent). The concordance was evaluated by calculating Kappa and Youden's J coefficients, obtaining values classified as good for both coefficients. Comparing Leucokit-La Plata and another commercial reference kit (Chekit Leucotest Bommeli AG, Bern Switzerland), the sensitivity (97.05 percent), specificity (94.11 percent), negative predictive value (92.30 percent) and positive predictive value (97.77 percent), were obtained. Applying Kappa and Jouden's Index (J) coefficients an almost perfect concordance was obtained between both kits. The Leucokit-La Plata is appropriate to apply to the commercialization of live bovines to export, bovine selection for hemo-vaccines and the implementation of control and eradication programmes.

O vírus da leucose bovina é um agente patogênico amplamente distribuído na população bovina de muitos países, principalmente naqueles com aptidão para leite. Uma vez infectado o bovino permanece como portador do vírus para toda a vida, e esse estado é correlacionado com o nivel detectável de anticorpos específicos. Neste trabalho apresenta-se a avaliação de um ELISA indireto (Leucokit-La Plata) para a detecção de anticorpos contra VLB. Comparando com a prova de imunodifusão como teste de referencia a sensibilidade é de 98.93 por cento; a especificidade de 79.74 por cento; o valor preditivo negativo de 99.56 por cento e o valor preditivo positivo 61.26 por cento. A correspondência entre as duas provas é de 83.9 por cento, semelhante ao resultados apresentados por outros autores (82.2 por cento). A concordância entre as duas provas foi avaliada calculando-se os coeficientes Kappa e J de Youden e os valores obtidos foram classificados como bons. Fazendo-se uma comparação entre Leucokit-La Plata e outro kit comercial de referência (Chekit Leucotest Bommeli AG., Bern Switzerland), obteve-se uma sensibilidade de 97.05 por cento, especificidade de 94.11 por cento, um valor preditivo negativo de 92.30 por cento e um valor preditivo positivo de 97.77 por cento. Os coeficientes Kappa e index de Youden deram uma concordância quase perfeita entre os dois testes. O equipamento Leucokit-La Plata é ideal para ser utilizado na comercialização de bovinos para exportação, para seleção de bovinos para hemovacinas e na implementação de medidas de contrôle e erradicação.

Ocorrência da leucose enzoótica dos bovinos no Estado do Pará, Brasil / Occurrence of enzootic bovine leukosis in the State of Pará, Brazil

The occurrence of the infection with Bovine Leukosis Virus (BLV) was examined in agar-gel immunodiffusion (AGID) test and with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in the State of Pará, Brazil. The blood sera were collected from different breeds including Nelore, Piemontes, Simental, Holstein Frisian, Indubrasil, Girolanda, Simbrasil and their cross-breedings. The majority of the animals were adults. The overall occurrence of infections was 49.8% (359/721) and 26.0% (174/668) for ELISA and AGID test, respectively. All animal groups examined showed infection in ELISA, however in the AGID test two groups were sera negative.(AU)

A ocorrência da infecção pelo Vírus da Leucose Enzoótica dos Bovinos (BLV) no Estado do Pará, foi estudada através do método de imunodifusão em ágar-gel (AGID) e por um ensaio imunoenzimatico (ELISA) indireto, paralelamente. Os exames foram realizados com amostras de soros sanguíneos oriundos de bovinos de diferentes raças sendo a maioria deles adultos. A prevalência observada foi de 49,8% (359/721) no ELISA e 26,0% (174/668) no AGID. Todos os 14 grupos dos animais estudados pelo ELISA indireto, mostraram a existência da infeção, enquanto que pelo método da AGID, dois grupos de animais foram negativos.(AU)

Infecção pelo vírus da leucose enzoótica bovina (BLV) / Enzootic bovine leukosis infection (BLV)

O vírus da leucose bovina (BLV) é o agente causal de duas condiçöes clínicas relacionadas aos bovinos: o linfossarcoma, doença neoplásica comum no gado adulto, e linfocitose persistente, proliferaçäo benígna das células linfóides. A identificaçäo do BLV em 1969 e o subseqüente desenvolvimento de técnicas sorológicas sensíveis permitiram o reconhecimento da infecçäo como prevalente em muitos países, principalmente no gado leiteiro. Devido a inexistência de tratamento ou de uma vacina eficaz, as pesquisas concentram-se nos modos de transmissäo e no desenvolvimento de programas de controle e prevençäo da infecçäo. Este trabalhlo faz uma revisäo bibliográfica sobre o BLV, incluindo modos de infecçäo, sinais clínicos e diagnóstico laboratorial, além de descrever medidas que o produtor deve seguir para prevenir ou controlar a disseminaçäo do vírus no rebanho.

Monitoraçäo da leucose enzoótica bovina no gado leiteiro da regiäo de Pitangueiras (SP) / Monitoring of enzootic bovine leukosis in dairy cattle from the Pitangueiras region in Sao Paulo, Brazil

Anticorpos precipitantes contra o antígeno gp51 do vírus da Leucose Enzoótica Bovina foram pesquisados em amostras de soros de vacas leiteiras da regiäo do Município de Pitangueiras, no Estado de Säo Paulo. As amostras sanguíneas eram de animais provenientes de sete propriedades rurais que foram acompanhadas anualmente de 1992 até 1995. Durante o ano de 1992 foram analisados 140 soros, dos quais 24 (17,1 por cento) eram reagentes positivos, 21 (15,0 por cento) suspeitos e 95 (67,9 por cento) negativos. Em 1993, dos 122 soros testados, 25 (20,5 por cento) foram positivos, 8 (6,6 por cento) suspeitos e 89 (72,9 por cento) negativos. No ano de 1994 foram testadas 135 amostras, das quais 45 (33,3 por cento) eram positivas, 19 (14,1 por cento) suspeitas e 71 (52,6 por cento) negativas. Finalmente, em 1995, foram analisadas as amostras de 119 animais sendo que 60 (50,4 por cento) eram positivas, 11 (9,2 por cento) suspeitas e 48 (40,4 por cento) negativas. Os resultados obtidos evidenciam que no decorrer do experimento houve um nítido aumento na prevalência da Leucose Enzoótica Bovina com o passar do tempo. Sob o prisma da Defesa Sanitária Animal, a crescente disseminaçäo da doença na populaçäo estudada serve como alerta sobre o comportamento epidemiológico e sobre a evoluçäo na difusäo da enfermidade em nosso meio

Avaliaçäo do leucograma de fêmeas da raça Holandesa naturalmente infectadas pelo Vírus da Leucose Bovina / Leucogram evaluation of bovine holstein females naturally infected by the Bovine Leukosis Virus

Desde o início do século já era conhecido que os animais afetados pelo Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB) apresentavam linfocitose. Esta alteraçäo foi muito usada como recurso auxiliar no diagnóstico clínico da LEB através do emprego das chamadas "chaves leucométricas". O presente estudo procurou avaliar o perfil do quadro leucocitário de fêmeas bovinas da raça holandesa naturalmente infectadas pelo Vírus da Leucose Bovina (VLB) dando-se particular atençäo à morfologia dos linfócitos. Para tanto, realizou-se o leucograma de 423 bovinos reagentes e 374 näo reagentes à prova de Imunodifusäo em Gel para a Leucose Bovina (IDLB). Os resultados obtidos mostraram que apenas os linfócitos apresentaram aumentos estatisticamente significantes nos animais reagentes à IDLB. No tocante ao aspecto morfológico dos linfócitos, concluiu-se que os linfócitos monocitóides e os linfócitos com núcleo duplo apresentaram contagens significativamente maiores nos animais reagentes

Leucose bovina no Brasil / Bovine leukosis in Brazil

Fez-se uma revisäo dos trabalhos publicados por pesquisadores brasileiros, desde 1942, a respeito da Leucose Bovina. Os trabalhos foram agrupados conforme o assunto, com destaque para ocorrência, epidemiologia, patogenia e diagnóstico. Foram encontradas citaçöes da doença no Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná, Säo Paulo, Rio de Janeiro, Espírito Santo, Minas Gerais, Bahia, Pernambuco, Piauí, Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul e Amazonas. Os levantamentos sorológicos realizados assinalaram prevalências de 12,5//a 70,9//da infecçäo pelo Vírus da Leucose Bovina (VLB) em bovinos. Enfatiza-se a necessidade de urgentes medidas para o controle da doença no Brasil